坊間對(duì)病毒分離的工作，有些誤解。

“分離”一詞讓人感覺(jué)病毒能從患者標(biāo)本中直接“挑揀”出來(lái)。但實(shí)際上，從病人身體上采集樣本中獲得滿足使用需求的病毒，不僅需要分離出病毒，還要讓它穩(wěn)定傳代。與其說(shuō)是病毒分離，不如說(shuō)是“馴服”。

在疫情最初，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所病原體鑒別實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊(duì)與時(shí)間賽跑，歷時(shí)5天5夜，完成了國(guó)家衛(wèi)生健康委交予的病原體平行檢測(cè)鑒別任務(wù)，并將病毒成功分離出來(lái)，獲得穩(wěn)定的病毒培養(yǎng)體系，支持圍繞病毒開(kāi)展的一系列研究。

3月23日，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所病原體鑒別實(shí)驗(yàn)室副主任任麗麗接受科技日?qǐng)?bào)采訪，講述作為“馴毒者”精打細(xì)算、前瞻部署的3個(gè)月。

讓病毒在實(shí)驗(yàn)室“活”起來(lái)，支撐后續(xù)科研

“病人的樣本來(lái)了之后，用1微升就沒(méi)1微升，它是不可再生的。但如果把里面的病毒分離出來(lái)、穩(wěn)定傳代，那么它就變‘活’了，就是可持續(xù)使用的資源?！比嘻慃愓f(shuō)，疫情初期，實(shí)驗(yàn)室接到疑似患者的臨床樣本，有灌洗液、痰液、氣道刮取物等，團(tuán)隊(duì)的任務(wù)是從中鑒定并“馴服”病毒。

由于樣本的總量有限，需要進(jìn)行病原學(xué)分析等多種操作，每種試驗(yàn)方案都是以微升計(jì)來(lái)取用樣本，進(jìn)行病原學(xué)鑒定，分離出病毒是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，進(jìn)行后續(xù)病毒致病機(jī)制研究等必須要讓病毒能在實(shí)驗(yàn)室中“繁衍生息”。

“樣本到我們手上的時(shí)候，已經(jīng)過(guò)了幾次的反復(fù)凍融，對(duì)其中病毒顆粒的完整性影響較大。”任麗麗解釋?zhuān)磸?fù)凍融之后病毒表面的突起蛋白會(huì)掉一些，這些突起如果缺失了，那么能進(jìn)到細(xì)胞里的效率就很低了，會(huì)影響病毒分離。

反復(fù)凍融使得讓新冠病毒的感染增殖并不容易，而它的高致病性又讓操作更多了一份危險(xiǎn)?！氨仨氃谏锇踩?級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作，考慮只能用微量樣本，我們專(zhuān)門(mén)用斜面管減少接種量，同時(shí)單管操作避免樣本相互間的交叉污染?！比嘻慃愓f(shuō)，由于時(shí)間緊、樣本有限，綜合考慮生物安全風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)驗(yàn)室對(duì)相關(guān)應(yīng)急支撐工作儲(chǔ)備了很多解決方案。

“在國(guó)家傳染病科技重大專(zhuān)項(xiàng)和中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目支撐下，包括我們團(tuán)隊(duì)在內(nèi)的國(guó)內(nèi)優(yōu)秀團(tuán)隊(duì)多年積累，明確冠狀病毒對(duì)于哪些細(xì)胞系比較敏感，哪些培養(yǎng)體系更容易把病毒分離出來(lái)?！比嘻慃愓f(shuō)，基于經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)的積累，團(tuán)隊(duì)很快獲得了“活”的病毒。

多年和呼吸道病毒打交道的經(jīng)驗(yàn)，讓團(tuán)隊(duì)對(duì)病毒復(fù)制有基本的判斷經(jīng)驗(yàn)，樣本接種細(xì)胞幾天后，細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)出病變效應(yīng)，這表明病毒已經(jīng)在細(xì)胞上開(kāi)始復(fù)制，通俗的理解就是“養(yǎng)活了”，但病毒滴度（濃度）是否足夠后續(xù)的研究，還需要持續(xù)培養(yǎng)適應(yīng)和篩選。團(tuán)隊(duì)也探索多種培養(yǎng)體系，尋找最適宜病毒“生長(zhǎng)”的體系。

“雖然很心急，但也要遵循科學(xué)規(guī)律，滴度很低的時(shí)候有傳代丟失的風(fēng)險(xiǎn)?！比嘻慃愓f(shuō)。既是戰(zhàn)鼓雷雷，也要心靜如水，這是抗疫科研一線的共性感受。一方面疫情如戰(zhàn)情，戰(zhàn)鼓雷雷催促科研進(jìn)展，另一方面對(duì)病毒的研究按照復(fù)制特性、心靜如水尋求突破點(diǎn)。

終于，在夜以繼日的努力之后，任麗麗團(tuán)隊(duì)成功將病毒分離出來(lái)，為后續(xù)的研究，如藥物篩選、疫苗評(píng)價(jià)等工作提供了重要資源。

優(yōu)化病毒檢測(cè)方法，追蹤病毒變異

“我們的應(yīng)急支撐工作沒(méi)有結(jié)束，在防控形勢(shì)的不同時(shí)期有不同的問(wèn)題要解決?！比嘻慃愓f(shuō)，團(tuán)隊(duì)的科研任務(wù)并沒(méi)有因?yàn)橐咔榉揽匦蝿?shì)的好轉(zhuǎn)而告一段落。

采集病人的咽拭子進(jìn)行核酸檢測(cè)是目前廣為使用的新冠病毒診斷方法。針對(duì)核酸咽拭子檢測(cè)可能受取樣、病程等多種因素的影響，可能影響檢測(cè)結(jié)果而發(fā)生漏診的問(wèn)題，任麗麗所在的科研團(tuán)隊(duì)用半個(gè)月的時(shí)間，利用基因工程技術(shù)表達(dá)、純化出病毒抗原，并研制了血清抗體檢測(cè)試劑，其中化學(xué)發(fā)光法正在申請(qǐng)國(guó)家審批，用于輔助臨床診斷。

“我們正在研發(fā)抗原檢測(cè)方法。”任麗麗說(shuō)，目前還沒(méi)有這一原理的檢測(cè)方法獲批，它是直接檢測(cè)病毒的蛋白，希望能為病毒早期診斷提供便捷的方法。

現(xiàn)階段，疫情在多個(gè)國(guó)家蔓延，掌握病毒的突變特征是科研工作需要回答的另一個(gè)問(wèn)題。“針對(duì)載量往往很低的樣本，必須要找到更高效、更快速的方法，更有效地獲得大量病毒基因組序列，這方面中國(guó)有很多科學(xué)家們正在努力?！比嘻慃愓f(shuō)，面對(duì)國(guó)際上快速蔓延的新冠疫情，希望通過(guò)對(duì)大量病毒的基因組分析掌握其變化態(tài)勢(shì)，為疫情防控提供科學(xué)依據(jù)。

推進(jìn)毒種標(biāo)準(zhǔn)化，新冠病毒成首個(gè)新入駐“保藏種”

由于我國(guó)在毒種保藏體系建設(shè)方面起步較晚，過(guò)去做病毒研究工作，毒種往往要從國(guó)外引進(jìn)。目前我國(guó)正在開(kāi)展毒種保藏體系建設(shè)，這一工作正在加快步伐。

“在上級(jí)部門(mén)的支持下，我們目前正在和兄弟單位一起完善毒種的標(biāo)準(zhǔn)化工作?！比嘻慃惤忉?zhuān)紫纫鞔_什么樣的毒種能夠進(jìn)入到保藏行列，而不是保存。其次，要求毒種保藏過(guò)程要遵循標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。

“國(guó)際學(xué)界公認(rèn)的保藏機(jī)構(gòu)會(huì)對(duì)毒種進(jìn)行細(xì)致的登記，就像‘戶口本’。上面寫(xiě)清楚它是誰(shuí)，基因組特點(diǎn)是什么，滴度如何，用何種培養(yǎng)體系?！比嘻慃愓f(shuō)，這些方面需要權(quán)威團(tuán)隊(duì)的驗(yàn)證，進(jìn)而形成行業(yè)共識(shí)的指南和規(guī)范。

“新冠病毒是中國(guó)研究團(tuán)隊(duì)首先分離出來(lái)的，可以將其作為一個(gè)模板，完善標(biāo)準(zhǔn)化的過(guò)程?！比嘻慃愓f(shuō)，“毒種在庫(kù)里面留好之后，要定期復(fù)蘇、擴(kuò)增，保證它的滴度和活力，將來(lái)無(wú)論是企業(yè)還是科研，要用的話，能把它用起來(lái)，這就是保藏過(guò)程?！?

從管理規(guī)范化和病毒真正能用起來(lái)的角度，毒種標(biāo)準(zhǔn)化的進(jìn)程正在逐步的推進(jìn)，任麗麗所在團(tuán)隊(duì)也參與了這些規(guī)范文件的制定推廣工作。從規(guī)范新落地的角度而言，新冠病毒將成為新入駐的“保藏種”。

相較于最早分離出新冠病毒而言，任麗麗認(rèn)為我國(guó)毒種標(biāo)準(zhǔn)化意義更加重大，是“基石性”的工作，是基礎(chǔ)戰(zhàn)略儲(chǔ)備的工作。

（來(lái)源：科技日?qǐng)?bào)）

（轉(zhuǎn)自院校新聞網(wǎng)）